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激光共聚焦掃描顯微鏡

撰稿: 臧志剛 發布時間:2019年07月01日

  激光共聚焦掃描顯微鏡(LCSM)在熒光顯微鏡成像的基礎上加裝激光掃描裝置, 以激光作為光源逐點激發樣品內熒光,采用精密針孔濾波技術,結合數據化圖像處理技術, 能在亞細胞水平采集和觀察組織和細胞內圖像。

  

  激光掃描共聚焦顯微鏡原理圖

  激光掃描共聚焦顯微鏡主要包括5個部分:光源模塊、共聚焦掃描模塊、熒光探測模塊、電子控制模塊、軟件系統。

  光源模塊為激光掃描共聚焦顯微鏡提供激光光源,包含405nm、488nm、561nm、638nm四束激光(可根據需求選擇其他波長激光),基本覆蓋可見光范圍內熒光激發。

  共聚焦掃描模塊包含了振鏡、掃描透鏡、筒鏡、物鏡、探測透鏡及狹縫,主要完成共聚焦掃描成像,并通過振鏡掃描與實現共聚焦成像。

  熒光探測模塊包含了多通道濾光片、四片濾光片以及PMT,主要實現熒光信號的探測。

  電子控制模塊主要負責光源模塊的開關控制、PMT增益調節、振鏡掃描的控制,其將硬件與軟件系統相連接,實現上位機與下位機的互動,確保系統的同步控制,保證正常成像。

  軟件系統主要為用戶界面、圖像采集、圖像重建、圖像識別及處理和圖像拼接等功能,通過軟件系統對電子控制模塊發送命令,完成共聚焦成像。

  

  熒光顯微鏡與共聚焦掃描頭

  本項目研究內容主要為突破并掌握振鏡高速掃描同步控制技術,采用矢量型控制信號驅動掃描振鏡,可有效減少振鏡調整時間,實現信號采集的行同步,實現每幀圖像自動精確配準。突破多通道熒光探測技術、微弱熒光信號探測技術等多項關鍵技術,采用特定帶寬的放大電路對四通道微弱熒光信號進行處理,增強熒光微弱信號強度,同時利用特定帶寬抑制其他頻率背景信號,提高熒光微弱信號的信噪比,實現多通道微弱熒光同時探測。進行光機電軟等子系統的設計、加工,采用模塊化設計,減少冗余的結構和整機體積,便于整機安裝與運輸;對光路及機械結構進行優化,采用多波長激光作為激光光源,可根據用戶需求,更方便地進行激光器的更換。

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